Лабораторная диагностика дифтерии
Цель: Выявление Corynebacterium diphtheriae (возбудителя дифтерии) и определение его токсигенности.
Материал для исследования: Мазки из зева и носа (берутся два сухих тампона).
Ход исследования:
Сутки 1:
- Взятие материала: Два сухих тампона используются для взятия мазков из зева и носа.
- Посев на КТА: Материал с тампонов засевают на кровяно-теллуритовый агар (КТА). Это селективная среда, которая способствует росту Corynebacterium diphtheriae и подавляет рост сопутствующей микрофлоры.
- Микроскопия: На этом этапе микроскопия не является обязательной, так как для дифтерии важен не только факт наличия бактерии, но и ее способность продуцировать токсин.
Сутки 2:
- Проба на токсигенность: После инкубации на КТА (обычно 18-24 часа) проводят отсев подозрительных колоний (10%) на сывороточный агар. Это необходимо для получения чистой культуры и дальнейшего определения токсигенности.
Сутки 3:
- Учет результатов (при положительном росте через 24 часа):
- Токсигенные: Если бактерии продуцируют дифтерийный токсин.
- Нетоксигенные: Если бактерии не продуцируют дифтерийный токсин.
- Проба Пизу (учет возможен через 6 часов, окончательный через 24 часа): Это биохимический тест, который позволяет определить ферментативные свойства бактерий. Проводят посев на среды с различными углеводами (Глюкоза, Сахароза, Крахмал, Мочевина, Нитраты) для идентификации вида Corynebacterium diphtheriae.
Сутки 4:
- Учет результатов (при положительном росте через 48 часов):
- Токсигенные: Если бактерии продуцируют дифтерийный токсин.
- Нетоксигенные: Если бактерии не продуцируют дифтерийный токсин.
Сутки 5:
На этом этапе продолжается учет результатов и проводятся дополнительные исследования при необходимости.
Примечание (дополнительные исследования и действия):
- Все выделенные культуры направляются в Референс-центр для исследования: Это необходимо для подтверждения результатов, типирования штаммов и эпидемиологического надзора.
- ПЦР на нетоксигенные токсиннесущие штаммы: Полимеразная цепная реакция используется для выявления гена токсина у штаммов, которые по каким-либо причинам не проявляют токсигенность в стандартных тестах. Это важно, так как такие штаммы могут стать токсигенными.
- ПЦР-РВ для подтверждения токсигенности: ПЦР в реальном времени используется для быстрого и точного подтверждения наличия гена токсина.
- МЛСТ секвенирование для установления генотипа: Мультилокусное секвенирование-типирование (MLST) – это метод молекулярного типирования, который позволяет определить генетическую принадлежность штамма, что важно для эпидемиологических исследований и отслеживания распространения инфекции.
Вывод: Данная схема показывает комплексный подход к диагностике дифтерии, включающий как классические бактериологические методы, так и современные молекулярно-генетические исследования, что позволяет максимально точно и быстро выявить возбудителя и определить его патогенность.