Конспект: Изготовление мазков (для школы)

Вот конспект по предоставленному тексту, оформленный так, чтобы его было удобно переписать в тетрадь школьнику. ***

Изготовление мазков

Мазки из культур микробов и мазки-отпечатки из органов трупа готовят на чистых обезжиренных предметных стеклах.

Подготовка предметного стекла

1. Непосредственно перед приготовлением мазка предметное стекло несколько раз проводят через пламя горелки.
2. Материал из пробирки с культурой берут прокаленной на пламени горелки бактериологической пипеткой или стерильной пастеровской пипеткой.
3. Тонкий конец пипетки после прокаливания на пламени сгибают под прямым углом.
4. Открывают пробирку над пламенем, вынимают пробку и открытый конец пробирки также обжигают на пламени.
5. Петлю прокаливают еще раз и, остудив, вводят в пробирку, не касаясь ее краев, захватывают каплю культуры.
6. При пользовании пипеткой тонкий конец ее обламывают и насасывают культуру, пользуясь при этом резиновой грушей (а не ртом).
7. Пробирку в этот момент держат в стороне от пламени горелки.
8. Затем закрывают пробирку над пламенем пробкой, также проведенной через пламя горелки.
9. Взятый материал наносят на предметное стекло и размазывают тонким слоем, тепло прокаливают и ставят в штатив.
10. Пипетку в сосуд с дезраствором.

Изготовление мазков-отпечатков

1. Из органов участок ор-гана, откуда предполагается сделать отпечаток, прижигают шпа-телем или обжигают на пламени.
2. Стерильными ножницами вы-резают небольшой кусочек исследуемого органа и, захватив его пинцетом, прижимают поверхностью разреза к предметному стеклу, делая таким образом несколько отпечатков.
3. Мазки с обратной стороны надписывают карандашом по стеклу, обводят и надписывают, указывая при этом номер или кличку животного и дату изготовления мазка.
4. Приготовленные таким способом мазки высушивают на воздухе и фикси-руют физическим (3–4-кратным проведением над пламенем го-релки) или химическим (спирт-ректификат в течение 15–20 мин; смесь спирта с эфиром поровну — 10–15; метиловый спирт — 5 мин; хлороформ — несколько секунд) способами.

Окраска мазков

Простой способ

1. На фиксированный мазок наливают несколько капель раствора карболового фуксина Циля в разведе-нии 1:10 или метиленовой синьки Леффлера.
2. Затем краску смы-вают дистиллированной водой, мазок высушивают фильтроваль-ной бумагой.

Сложные способы

Окраска по Граму

1. На фиксирован-ный мазок кладут кусочек фильтровальной бумаги и на него наливают раствор генцианвиолета.
2. Через 2 мин бумагу удаляют, раствор сливают и препарат промывают водой.
3. После этого препарат обрабатывают спиртом-ректификатом, наливают люголевый раствор.
4. Спустя 1 мин его сливают и препарат в течение 30 с обрабаты-вают спиртом-ректификатом, затем промывают водой и окраши-вают спирто-водным фуксином (для этого карболовый фуксин разводят 1:10 водой) в течение 2 мин.
5. После этого препарат промывают водой и рассматривают под микроскопом.
6. Можно использовать заранее приготовленные и высушенные бумажки, пропитанные 1%-ным спиртовым раствором генциан-виолета.
7. Их кладут на фиксированный мазок и окрашивают 1%-ным спиртовым раствором генцианвиолета.

Микрокартина: грамположительные микробы темно-фиолето-вые, грамотрицательные — розовые.

Окраска по Цилю – Нильсену

1. Применяют при микроскопи-ческой диагностике туберкулеза и паратуберкулеза.
2. Фиксирован-ный на пламени мазок покрывают фильтровальной бумажкой, наливают на нее карболовый фуксин и подогревают до появле-ния паров.
3. После этого обесцвечивают препарат 5%-ным водным раствором серной кислоты в течение 3–5 мин.
4. Снова промывают водой и докрашивают в течение 3–5 мин метиленовой синькой Леффлера.
5. Краску смывают водой, препарат высушивают.

Микрокартина: спирто-кислотоустойчивые микробы красные, остальные — синие (см. цв. табл. I).

Окраска по Козловскому

1. Применяют для микроскопической диагностики бруцеллеза.
2. Фиксированный на пламени мазок ок-рашивают 2%-ным раствором сафранина (раствор готовят непо-средственно перед употреблением) с интенсивным подогревани-ем (до появления паров).
3. Промывают водой и окрашивают 1%-ным водным раствором малахитовой зелени в течение 1 мин.
4. Затем промывают водой и высушивают.

Микрокартина: бруцеллы красные, остальные микробы зеле-ные (см. цв. табл. I).

Окраска капсул

Применяется при микроскопической диагностике сибирской язвы.

Способ Михина

1. Фиксированный мазок при подогревании ок-рашивают метиленовой синькой Леффлера в течение 2–3 мин.
2. Краску быстро смывают водой, мазок высушивают.

Микрокартина: капсулы светло-розовые, бациллы темно-синие.

Окраска спор

Способ Пешкова

1. Фиксированный мазок окрашивают кипящей метиленовой синькой Леффлера в течение 20 с.
2. Затем промывают водой и докрашивают 0,5%-ным водным раствором нейтральрота в течение 30 с.
3. Затем промывают водой и высушивают.

Микрокартина: споры синие, микробные тела розовые, ядра фиолетовые.

Контрольные вопросы

1. Каковы основные группы микроорганизмов?
2. На каких принципах основана классификация микроорганизмов?
3. Из каких струк-тур состоит бактерия?
4. В чем состоят меры личной профилактики при работе с патологическим материалом, культурами микроорганизмов и животными, боль-ными инфекционными болезнями?
5. Как приготовить и окрасить мазки из культур микробов, из патологического материала?

Глава 2. Физиология микроорганизмов

Химический состав микроорганизмов

Физиологические, об-менные процессы тесно связаны с химическим составом микроб-ной клетки. В нее входят химические элементы — органогены: азот, углерод, кислород, водород. Из этих элементов и их соеди-нений микробными клетками синтезируют белки, углеводы, липиды, ферменты, витамины и др.

Составными частями бактериальной клетки являются вода (до 75–80 %) в свободном или связанном виде, минераль-ные вещества, в том числе неорганические природы (фос-фор, сера, магний, калий, железо, хлор и др.), элементы (молибден, кобальт, бор, марга-нец, цинк, медь и др.), органические вещества — белки, нуклеиновые кислоты, углеводы, липиды, ферменты и другие соединения.