Определение содержания глюкозы в сыворотке крови - Решение

Вот решение задачи и ответы на вопросы, оформленные так, чтобы было удобно переписать в тетрадь школьнику. Название работы: 1. Определение содержания глюкозы в сыворотке крови Содержание работы: Принцип метода. В основе метода лежит ферментативное окисление глюкозы кислородом воздуха при участии фермента глюкозооксидазы. При этой реакции образуется перекись водорода в количестве эквимолярном окисленной глюкозе. Перекись водорода в присутствии пероксидазы крови окисляет добавленный о-толуидин, который приобретает синее окрашивание. Интенсивность возникшей окраски прямо пропорциональна концентрации глюкозы и определяется на фотоэлектроколориметре. Метод специфичен для глюкозы. Исследуемый материал и реактивы: 1. Кровь. 2. Вата. 3. Спирт. 4. Скарификатор. 5. Ферментно-хромогенная смесь (1 таблетка). 6. Антикоагулянт (оксалат натрия, фторид натрия). 7. Калибратор (раствор глюкозы с концентрацией 10 ммоль/л). 8. Дистиллированная вода. Ход работы: А. Приготовление рабочих растворов. 1. Таблетку «ферменты-хромогены» растворить в 100 мл дистиллированной воды, тщательно перемешивая, не встряхивая (!). Допускается наличие мелких нерастворимых частиц. 2. Таблетку антикоагулянта растворить в 50 мл дистиллированной воды. Б. Приготовление калибровочной пробы. В пробирку внести 1 часть калибратора и 9 частей раствора антикоагулянта, тщательно перемешать. Полученную калибровочную смесь использовать для анализа. В. Определение содержания глюкозы в плазме крови. Для получения плазмы крови в центрифужную пробирку внести 0,9 мл раствора антикоагулянта, добавить 0,1 мл крови (или 0,45 мл и 0,05 мл соответственно), тщательно перемешать и центрифугировать при 1000 об/мин в течение 15 минут. Надосадочную жидкость перенести в чистую пробирку и использовать для анализа. Для проведения анализа на КФК в пробирки внести 2,0 мл рабочего раствора и добавить по 0,2 мл надосадочной жидкости, калибровочной смеси и дистиллированной воды для кюветы с длиной оптического пути 10 мм, и по 0,4 мл – для кюветы с длиной оптического пути 5 мм. При использовании FP-901 в кюветы внести 0,7 мл рабочего раствора и 0,1 мл надосадочной жидкости. Г. Определение содержания глюкозы в сыворотке крови. При использовании КФК внести в пробирки образцы сыворотки крови и реагенты по схеме: Для кювет с длиной оптического пути 10 мм: Реагенты: Опытная проба, мл: 2,0 (рабочий раствор) + 0,02 (сыворотка крови) Калибр. проба, мл: 2,0 (рабочий раствор) + 0,02 (калибратор) Холостая проба, мл: 2,0 (рабочий раствор) + 0,02 (вода дистил.) Для кювет с длиной оптического пути 5 мм: Реагенты: Опытная проба, мл: 2,0 (рабочий раствор) + 0,04 (сыворотка крови) Калибр. проба, мл: 2,0 (рабочий раствор) + 0,04 (калибратор) Холостая проба, мл: 2,0 (рабочий раствор) + 0,04 (вода дистил.) Пробы тщательно перемешать и инкубировать в течение 15 мин при +37°C (водный термостат) или в течение 25 мин при 18-25°C («на столе»). Через 5-10 мин после начала инкубации пробирки с пробами интенсивно встряхнуть вручную. После инкубации измерить величину оптической плотности опытной и калибровочной проб против холостой пробы в кюветах с длиной оптического пути 5 или 10 мм при длине волны 500 (490-540) нм. Окраска проб сохраняет стабильность в течение более 4-х часов после окончания инкубации. Концентрации глюкозы в пробах провести по формуле: \[ C = \frac{E_о}{E_{ст}} \cdot 10 \] где \( C \) – концентрация глюкозы, моль/л; \( E_о \) – оптическая плотность опытной пробы, ед.опт.плот.; \( E_{ст} \) – оптическая плотность калибровочной пробы, ед.опт.плот.; \( 10 \) – концентрация глюкозы в калибраторе, моль/л. Указания к оформлению лабораторной работы: В тетради для лабораторных работ запишите ход работы, полученный результат и сделайте выводы. Ответьте на контрольные вопросы: 1. Какова нормальная концентрация глюкозы (сахара) в крови? Нормальная концентрация глюкозы в крови у здорового человека натощак составляет от 3,3 до 5,5 ммоль/л. 2. Какие углеводы могут всасываться в тонком кишечнике человека? В тонком кишечнике человека могут всасываться только моносахариды. Это глюкоза, фруктоза и галактоза. Дисахариды (например, сахароза, лактоза, мальтоза) и полисахариды (например, крахмал, гликоген) сначала расщепляются ферментами до моносахаридов, а затем уже всасываются. 3. Что такое гипергликемия и гипогликемия? При каких состояниях организма наблюдаются гипер- и гипогликемия? * Гипергликемия – это состояние, при котором уровень глюкозы в крови повышен. Наблюдается при: * Сахарном диабете (наиболее частая причина). * Стрессе (выброс гормонов, повышающих уровень глюкозы). * Некоторых эндокринных заболеваниях (например, гипертиреоз, синдром Кушинга). * Приеме некоторых лекарственных препаратов. * После обильного приема пищи, богатой углеводами (физиологическая гипергликемия). * Гипогликемия – это состояние, при котором уровень глюкозы в крови понижен. Наблюдается при: * Передозировке инсулина или сахароснижающих препаратов у больных сахарным диабетом. * Длительном голодании. * Интенсивных физических нагрузках без достаточного поступления углеводов. * Некоторых заболеваниях печени. * Опухолях поджелудочной железы (инсулинома), продуцирующих избыток инсулина. * Злоупотреблении алкоголем.